Клеточные механизмы, изучение поведения клеток

Архив автора

Таким образом, метилметансульфонат вызывал первичное блокирование клеток в фазе S и не влиял на фазу G2. Отсутствие блокирования клеток в фазе G2 отличает действие этого соединения от действия алкилирующих соединений из класса хлорэтиламинов.
М. Fox и В. Fox (1967) предложили метод количественного расчета степени торможения перехода в клеточном цикле, представляющий о’бщий интерес. В опыте с непрерывной меткой 3Нтимидином различие между величиной индекса метки во время t и через 30 мин после добавления 3Нтимидина показывает интенсивность перехода из фазы Gi в фазу S, т. е. число клеток, вошедших в фазу S за время t. Число клеток, которые из фазы S перешли в фазу G2 за время t, определяется как различие между величиной индекса метки при непрерывной метке во время t и величиной индекса метки при пульсовой метке за это же время. В контроле процент клеток, прошедших переходы из фазы Gi в фазу S и из фазы S в фазу G2, возрастал линейно со временем и с одинаковой скоростью. При действии на культуру метилметансульфоната переход фазы S в фазу G2 в течение 3 ч не происходил. В течение последующих 57 ч этот переход происходил в 4 раза медленнее, чем в контроле. Поскольку выжившая фракция при описанных выше нарушениях в цикле составляла 1, приведенные данные отражают поведение погибших клеток. Эти клетки временно задерживались в фазе S, а затем, как показал подсчет числа клеток, все клетки делились в течение 40 ч после действия препарата. Характер прохождения цикла клетками, которые при клонировании определяются как погибшие, дает важную информацию о механизмах гибели клеток. Изменения, вызванные метилметансульфонатом, были совместимы с прохождением всех фаз цикла и лишь в следующем цикле приводили клетки к гибели.

в фазе S резко уменьшалась и в последующие часы происходило увеличение митотического индекса в 2 раза.
Следовательно, клетки, временно блокированные в фазе S, синхронно вступали в митоз. Подсчет индекса метки, митотического индекса и процента меченых митозов отчетливо показал увеличение продолжительности фазы S и, следовательно, торможение синтеза ДНК. Однако при подсчете числа гранул торможение включения 3Нтимидина не обнаруживалось. Такое положение является исключением, поскольку обычно при действии алкилирующих соединений торможение скорости синтеза ДНК, определяемое по интенсивности включения, оказывается таким же, как торможение скорости перехода клеток по фазе S, определяемое при анализе клеточной кинетики.

Во всех приведенных выше работах изучалось действие на клеточный цикл алкилирующих соединений из класса хлорэтиламинов. Поэтому представляет интерес сравнить с этими данными результаты изучения нарушений в цикле при действии метилметансульфоната, алкилирующего препарата из группы сульфоксисоединений. М. Fox и В. Fox (1967) изучали действие метилметансульфоната на культуру лимфатической лейкемии Р388. Препарат использовался в дозе, вызывавшей гибель 99 клеток. Митотический индекс начинал постепенно уменьшаться через 12 ч и достигал минимального значения через 6 ч. Поскольку tG2 равен 1,5 ч, эти данные показывают отсутствие первичного блокирования клеток в фазе G2. Это подтвердилось тем, что значение tc2, определенное по кривой меченых митозов, было одинаковым в опыте и контроле. После воздействия препарата число меченых митозов составляло 100 в течение периода, за который в контроле наблюдалось две волны меченых митозов. Это показывает значительное удлинение фазы S в клетках, которые во время добавления к культуре препарата находились в фазах Gi и S. Число клеток в фазе S через 8 ч увеличивалось на 28, что отражает увеличение ts при сохранении перехода из фазы Gi в фазу S. Сохранение перехода из фазы Gi в фазу S подтвердилось тем, что при непрерывной метке увеличение индекса метки в опыте в течение 5 ч происходило лишь незначительно медленнее, чем в контроле. Через 20 ч доля клеток 5. Гибель меченых клеток в асцитном р, аке Эрлиха после введения сарколизина. 3НТИ1МИД»Н введен за 1 ч до введения сарколизина. По оси абсцисс время после введения сарколизина; по оси ординат число меченых клеток по отношению к числу меченых клеток во время введения сарколизина.

Количестве, соответствующем фазе G2. Это показывает наличие первичного и вторичного блокирования клеток в фазе G2 и отсутствие блокирования или непродолжительное блокирование клеток в фазах Gi и S. Через 4872 ч митотический индекс увеличивался и гистограмма распределения количества ДНК сдвигалась в сторону фазы Gi. Следовательно, после введения сарколизина в низкой дозе блокирование клеток в фазе G2 является обратимым и через 4872 ч все или часть блокированных клеток делится.