Клеточные механизмы, изучение поведения клеток

Архив рубрики «Стационарная культура»

Стационарная культура клеток была менее чувствительна к адриамицину, чем экспоненциально растущая культура при больших дозах антибиотика выжившая фракция снижалась до 4 и 0,01 соответственно (Barranco, Novae, 1974). Все же адриамицин вызывал гибель большинства покоящихся клеток, что указывает на целесообразность применения этого препарата для лечения опухолей с небольшим пролиферативным пулом.
Таким образом, в этих работах показано, что к алкилирующим соединениям, актиномицину D и адриамицину, чувствительность культуры в стационарной фазе меньше или одинакова с чувствительностью в логарифмической фазе, а к антиметаболитам чувствительность в стационарной культуре всегда значительно меньше.

В ряде работ показана значительно более высокая чувствительность стационарной культуры по сравнению с активно растущей к бисрхлорэтилнитрозомочевине и блеомицину. Hagemann с соавторами (1973) показали, что в культуре мастоцитомы плечо на кривой дозаэффект имеется только в логарифмической фазе роста, в которой также несколько больше величина D0. В результате этого гибель клеток начиналась в логарифмической фазе роста при значительно большей концентрации препарата. Выжившая фракция снижалась до 0,01 в логарифмической и стационарных фазах роста при наличии в среде бисрхлорэтилнитрозомочевины в концентрации 20 и 10 мкг/мл соответственно. Barranco с соавторами (1973в) описали еще более резкое различие чувствительности к бисрхлорэтилнитрозомочевине к культуре в логарифмической и стационарной фазах роста. В стационарной культуре клеток СНО хомячка воздействие препарата в течение часа в концентрации 25 мкг/мл снижало выжившую фракцию до 0,02. На культуру в логарифмической фазе роста такое воздействие вообще не влияло и лишь при повышении концентрации препарата до 100 мкг/мл выжившая фракция снижалась до 1 10. При этом так же, как и в культуре мастоцитомы, в культуре СНО значительное плечо 78 в кривой дозаэффект наблюдалось только в логарифмической фазе роста. Эти данные указывают на пониженную способность клеток в стационарных культурах к репарации сублетальных повреждений.

Tobey и Crissman (1975) также доказали, что клетки культуры СНО в стационарной фазе более чувствительны к бисрхлорэтилнитрозомочевине и другим производным нитрозомочевины, чем клетки в растущей культуре.
Barranco с соавторами (1973в) показали, что культура СНО в стационарной фазе характеризуется повышенной чувствительностью к блеомицину. После воздействия блеомицина в концентрации 100 мкг/мл в течение часа выжившая фракция в стационарной культуре была в 10 раз меньше, чем в активно растущей. Hahn с соавторами (1973) указывают, что клетки, вышедшие из цикла, характеризуются повышенной чувствительностью к блеомицину.

Twentyman и Bleehen (1973) детально исследовали зависимость чувствительности к бис3хлорэтилнитрозомочевине к блеомицину от фазы роста на модели культуры клеток саркомы ЕМТ6 мышей. В стационарной культуре 70 клеток находились в фазе Gi и индекс метки составлял 26 при 52 в активно растущей культуре. Зависимость выжившей фракции от дозы при действии «блеомицина в течение 2 ч на культуру в логарифмической фазе роста была двухфазной. В чувствительной субпопуляции (80 клеток) D0 составляла 10 мкг/мл, что в 2′/г раза меньше, чем в резистентной субпопуляции. В стационарной культуре Do составляла 42 мкг/мл, т. е. была значительно больше, чем D0, для наиболее резистентных клеток в активно растущей культуре. При действии блеомицина в течение 24 ч D0 в стационарной культуре была в 3 раза больше. Определение зависимости гибели клеток от времени действия блеомицина показало, что выжившая фракция уменьшается в 2 раза в активно растущей культуре каждые 2, 8 ч, а в стационарной каждые 17 ч. Таким образом, по данным Twentyman и Bleehen (1973), стационарная культура характеризуется пониженной чувствительностью к блеомицину. Этот вывод отличается от результатов работ Barranco с соавторами (1973в) и Hahn с соавторами (1973), в которых показана повышенная чувствительность к блеомицину в стационарной фазе.

В последующем Twentyman и Bleehen (1975) показали, что в ранней фазе плато (индекс метки 25) чувствительность клеток ниже, а в поздней фазе плато (клетки не размножаются) чувствительность больше, чем в фазе активного роста. Таким образом, по чувствительности к блеомицину фаза плато имеет два различных периода, что, возможно, объясняет отличие в результатах, полученных в разных лабораториях.
Чувствительность культуры опухоли ЕМТ6 в логарифмической и стационарной фазах роста к бис3хлорэтилнитрозомочевине в низких дозах была одинакова, но при увеличении дозы в стационарной культуре погибало в 10 раз больше клеток (Twentyman, Bleehen, 1973). Таким образом, по данным четырех групп исследователей, культура в стационарной фазе роста значительно более чувствительна к >бис)3хлорэтилнитрозомочевине, чем культура в логарифмической фазе роста.