Архив автора
Распределение чувствительности
Распределение чувствительности к адриамицину по циклу в культуре клеток лимфомы человека несколько отличалось от такого распределения в культурах HeLa и СНО. В культуре лимфомы наиболее чувствительными были клетки на границе фаз S и G2 и в фазе G2, а клетки в фазе S были умеренно чувствительны (Drewinko, Gottlieb, 1973). Во всех Субпопуляциях выжившая фракция уменьшалась экспоненциально с увеличением дозы и D0 составляла для клеток в ранней фазе S 130, в середине фазы S 160, на границе фаз S и G2 90, в фазе G2 80, в начале фазы Gi 130 и на границе фаз Gi и S 190 нг/мл. Резкое снижение выжившей фракции в асинхронной культуре показывает, что, несмотря на определенные колебания чувствительности по циклу, адриамицин эффективно убивает клетки во всех фазах цикла.
Таким образом, клетки в фазе
Таким образом, клетки в фазе G2 были менее чувствительны к дауномицину, чем клетки в фазе S, но более чувствительны, чем клетки в фазе Gj. Зависимость гибели клеток от фазы цикла в культуре клеток HeLa при действии адриамицина была такой же, как при действии дауномицина, что не удивительно ввиду близкого химического строения этих двух антибиотиков (S. Kim, J. Kim, 1972). В культуре клеток СНО хомячка распределение по циклу чувствительности к адриамицину носило сложный характер и характеризовалось наличием двух максимумов чувствительности (Ваггапсо е. а., 1973а). Клетки в митозе были высокочувствительны (выжившая фракция 2), в фазе Gj чувствительность уменьшалась, а в начале фазы S вновь резко повышалась и становилась та 70 кой же, как в митозе. В поздней фазе S резистентность клеток повышалась, а в фазе G2 клетки становились более чувствительными. Следует отметить, что Barranco и др. при действии разных препаратов наблюдали сложный характер зависимости гибели от фазы цикла, что, очевидно, отражает особенности реакции культуры клеток СНО, использованной этими авторами.
Таким образом, два антибиотика
Таким образом, два антибиотика, тормозящие синтез РНК,’актиномицин D и иогаломицин, характеризовались сходной зависимостью гибели клеток от фазы цикла, показанной на разных культурах и при использовании различных методов синхронизации. Наиболее чувствительными к обоим антибиотикам являлись клетки в конце фазы Gj и в начале фазы S, а наиболее резистентными были клетки в фазе G2.
Гибель клеток детально изучалась также при действии 3 других антибиотиков дауномицина и адриамицина, относящихся к группе антрациклинов, и блеомицина нового антибиотика, являющегося по строению сложным гликопептидом. Kim с соавторами (1968а) показали, что в культуре клеток HeLa при действии дауномицина в концентрации 50 нг/мл клетки в фазе Gi не погибают. По мере вхождения в фазу S их чувствительность повышается и выжившая фракция минимальна в период максимальной величины индекса метки. При выходе клеток из фазы S их чувствительность уменьшается. В более высокой концентрации дауномицин вызывал гибель клеток в фазах Gi и G2, но клетки в фазе S оставались наиболее чувствительными. Поскольку к концу цикла синхронность культуры уменьшалась и в популяции одновременно присутствовали клетки в фазах Gb S и G2, для точной оценки чувствительности клеток в фазе G2 получали «очищенную» субпопуляцию клеток в фазах S и G2. Было показано, что выжившая фракция в этих субпопуляциях составляет 3,2 и 8,9 соответственно.
Sawicki и Godman
Sawicki и Godman (1971) изучали зависимость от фазы цикла одного типа гибели клеток пикноза, наступающего в течение 12 ч после воздействия актиномицина D. К этому виду острой гибели клеток среди ряда изученных культур были чувствительны только клетки HeLa, Избирательная чувствительность клеток в период перехода из фазы Gi в фазу S и в фазе S была показана двумя методами. В культуру на 1 ч добавляли одновременно 3Нтимидин и актиномицин D и определяли долю меченых пикнотических ядер. Практически все клетки, погибшие через 6 ч, содержали метку. Культуру синхронизировали тимидином и через 2 ч после 69 его удаления, когда клетки находились в фазе S, на 1 ч добавляли актиномицин D. При этом через 6 ч погибало 46 и через 12 ч 90 клеток. Если актиномицин D добавляли через 8 ч после тимидина, когда клетки находились в фазе G2, то через 6 ч погибших клеток пе было, а через 12 ч погибало 50 клеток. Если актиномицин D добавляли в то время, когда клетки были блокированы тимидином на границе фаз Gi и S, то гибель клеток наступала еще раньше, чем при воздействии в фазе S.