Клеточные механизмы, изучение поведения клеток

Архив рубрики «Стационарная культура»

Для определения влияния сарколизина на разведение метки мышам ввели 3Нтимидин, через 1 ч сарколизин и в течение 120 ч определяли интенсивность метки и число меченых клеток ( 45). Интенсивность метки в течение всего периода наблюдения снижалась незначительно, составляя через 120 ч 75 по отношению к исходной величине. Разведение метки в этом опыте отражает деление клеток, которые во время введения сарколизина были в фазе S. Уменьшения числа гранул на 25 могло бы указывать на деление половины этих клеток, но гибель значительного числа меченых клеток делает такой вывод маловероятным. Такое небольшое разведение метки можно объяснить дегенерацией интенсивно меченых клеток. Индекс метки при введении 3Нтимидипа до сарколизина резко уменьшался через 72120 ч (см. 5). Это уменьшение можно объяснить лишь преимущественной дегенерацией клеток, которые во время введения сарколизина были в фазе S. Два других возможных объяснения падения индекса метки (преимущественная пролиферация немеченых клеток и резкое разведение метки в меченых клетках) исключаются, поскольку в течение всего периода наблюдения скорость пролиферации находилась на очень низком уровне. Уменьшение доли меченых клеток с 40 до 6 через 72120 ч показывает, что за это время дегенерирует и исчезает из популяции» 90 клеток, которые во время введения сарколизина были в фазе S.

Через 48 ч после введения сарколизина в опухоли появлялись клетки резко увеличенного размера (диаметр 20 мкм и более). Число таких клеток составляло через 4872 ч 20 24 и через 120 ч 6. Следовательно, через 72120 ч большая часть увеличенных клеток погибала.
Таким образом, в асцитной опухоли Эрлиха сарколизин вызывал следующие нарушения: первичное блокирование фаз S и G2, резкое угнетение пролиферации в течение 120 ч и дегенерацию 90 клеток, которые во время введения препарата находились в фазе S.

Bassleer и Desaive (1971) методом цитофотометрии ДНК изучили действие небольших доз сарколизина (1 мкг) на тетраплоидную сублинию асцитного рака Эрлиха. Через 24 ч после введения сарколизина 96 клеток содержали ДНК в ко 4. Влияние сарколизина на разведение метки в асцитном раке Эрлиха. 3НтимиДин введен за 1 ч до введения сарколизина.
По оси абсцисс время после введения сарколизина; по оси ординат интенсивность метки в процентах по отношению к интенсивности метки во время введения препарата.

Количестве, соответствующем фазе G2. Это показывает наличие первичного и вторичного блокирования клеток в фазе G2 и отсутствие блокирования или непродолжительное блокирование клеток в фазах Gi и S. Через 4872 ч митотический индекс увеличивался и гистограмма распределения количества ДНК сдвигалась в сторону фазы Gi. Следовательно, после введения сарколизина в низкой дозе блокирование клеток в фазе G2 является обратимым и через 4872 ч все или часть блокированных клеток делится.

Во всех приведенных выше работах изучалось действие на клеточный цикл алкилирующих соединений из класса хлорэтиламинов. Поэтому представляет интерес сравнить с этими данными результаты изучения нарушений в цикле при действии метилметансульфоната, алкилирующего препарата из группы сульфоксисоединений. М. Fox и В. Fox (1967) изучали действие метилметансульфоната на культуру лимфатической лейкемии Р388. Препарат использовался в дозе, вызывавшей гибель 99 клеток. Митотический индекс начинал постепенно уменьшаться через 12 ч и достигал минимального значения через 6 ч. Поскольку tG2 равен 1,5 ч, эти данные показывают отсутствие первичного блокирования клеток в фазе G2. Это подтвердилось тем, что значение tc2, определенное по кривой меченых митозов, было одинаковым в опыте и контроле. После воздействия препарата число меченых митозов составляло 100 в течение периода, за который в контроле наблюдалось две волны меченых митозов. Это показывает значительное удлинение фазы S в клетках, которые во время добавления к культуре препарата находились в фазах Gi и S. Число клеток в фазе S через 8 ч увеличивалось на 28, что отражает увеличение ts при сохранении перехода из фазы Gi в фазу S. Сохранение перехода из фазы Gi в фазу S подтвердилось тем, что при непрерывной метке увеличение индекса метки в опыте в течение 5 ч происходило лишь незначительно медленнее, чем в контроле. Через 20 ч доля клеток 5. Гибель меченых клеток в асцитном р, аке Эрлиха после введения сарколизина. 3НТИ1МИД»Н введен за 1 ч до введения сарколизина. По оси абсцисс время после введения сарколизина; по оси ординат число меченых клеток по отношению к числу меченых клеток во время введения сарколизина.