Клеточные механизмы, изучение поведения клеток

Rickinson (1970) также исследовал влияние на клеточный цикл синхронизированных фибробластов L актиномицина D в концентрации, избирательно тормозящей синтез РНК в ядрышке (40 нг/мл). Добавление актиномицина D через 1 ч после посева клеток резко тормозило, добавление через 4 ч не влияло на переход клеток в фазу S. Следовательно, актиномицин D был эффективен только в начале фазы Gi. Опыты с кратковременным воздействием ингибитора дали такой же результат. Действие актиномицина D в течение первых 2 ч фазы G: тормозило, а действие в течение 35 ч фазы Gj не влияло на инициацию синтеза ДНК. В немногочисленных клетках, которые вошли в фазу S, несмотря на присутствие в среде актиномицина D, интенсивность включения 3Нтимидина не была снижена. Воздействие актиномицина D на клетки в фазе G2 не влияло на время их вступления в митоз, а воздействие на клетки в фазах Gi и S значительно замедляло время деления. При этом, чем в более ранний период цикла начиналось действие актиномицина D, тем на большее время задерживалось деление. Торможение деления клеток, обработанных актиномицином D в начале фазы Gb очевидно, является следствием задержки их вступления в фазу S, а обработанных в конце фазы Gi и в фазе S следствием бло кирования в фазе G2. Следовательно, в опытах Rickinson (1970) торможение синтеза РНК блокировало клетки в фазе G2 только в том случае, если торможение начиналось в фазах Gi и S. Таким образом, в культуре фибробластов L актиномицин D в концентрации, избирательно тормозящей синтез РНК в ядрышке, блокировал переход в фазу S клеток в начале фазы Gb вызывал вторичное блокирование клеток в фазе G2 и не влиял на синтез ДНК в фазе S и переход клеток из фазы G2 в митоз. Вторичное блокирование фазы G2 показывает, что синтез РНК в ядрышке, необходимый для деления, происходил в фазе S.