Клеточные механизмы, изучение поведения клеток

Подробная информация о влиянии химиотерапевтических препаратов на клеточный цикл может быть получена при одновременном использовании методов авторадиографии и цитофотометрии ДНК Tobey и Crissman (1972) методом микрофлуорометрии определяли содержание ДНК в огромном числе (десятки тысяч) клеток культуры СНО, что давало возможность получить точное распределение количества ДНК и определить число клеток в разных фазах цикла. В культуре, находившейся в среде без изолейцина 30 ч, почти все клетки были в фазе Gi и лишь единичные клетки в фазе G2. К такой культуре добавляли одновременно изолейцин и испытуемый препарат и через 10 ч определяли количество ДНК и включение 3Нтимидина при непрерывной метке после отмывания от препарата. В таких опытах наблюдались три основных типа реакции на препарат: 1) если препарат блокировал клетки в фазе Gb то количество ДНК оставалось на уровне 2 С и меченые клетки появлялись лишь через 4 ч после добавления 3Нтимидина, что соответствует tGi в контроле, 2) если препарат не влиял на фазу Gb но тормозил переход из фазы Gi в фазу S, то количество ДН. К также сохранялось на уровне 2 С, но клетки быстро вступали в фазу S, 3) при отсутствии влияния на фазу Gi и переход из фазы Gi в фазу S количество ДНК возрастало в присутствии препарата и клетки быстро делились после его удаления. Действие оксимочевины и арабинозилцитозина характеризовалось реакцией второго типа. Клетки при действии этих препаратов делились после их удаления быстрее, чем в контроле. Это показывает, что в присутствии препаратов клетки проходили фазу Gi и накапливались в конце фазы Gj. При действии на культуру блеомицина в популяции содержались клетки с количеством ДНК, соответствующим фазе S, и накапливалось значительное число клеток в фазе G2. После удаления препарата клетки не делились. Следовательно, действие блеомицина характеризовалось реакцией третьего типа с дополнительным блокированием клеток в фазе G2.