Клеточные механизмы, изучение поведения клеток

27.05.2011

Bassleer и Desaive (1971) методом цитофотометрии ДНК изучили действие небольших доз сарколизина (1 мкг) на тетраплоидную сублинию асцитного рака Эрлиха. Через 24 ч после введения сарколизина 96 клеток содержали ДНК в ко 4. Влияние сарколизина на разведение метки в асцитном раке Эрлиха. 3НтимиДин введен за 1 ч до введения сарколизина.
По оси абсцисс время после введения сарколизина; по оси ординат интенсивность метки в процентах по отношению к интенсивности метки во время введения препарата.

Через 48 ч после введения сарколизина в опухоли появлялись клетки резко увеличенного размера (диаметр 20 мкм и более). Число таких клеток составляло через 4872 ч 20 24 и через 120 ч 6. Следовательно, через 72120 ч большая часть увеличенных клеток погибала.
Таким образом, в асцитной опухоли Эрлиха сарколизин вызывал следующие нарушения: первичное блокирование фаз S и G2, резкое угнетение пролиферации в течение 120 ч и дегенерацию 90 клеток, которые во время введения препарата находились в фазе S.

Для определения влияния сарколизина на разведение метки мышам ввели 3Нтимидин, через 1 ч сарколизин и в течение 120 ч определяли интенсивность метки и число меченых клеток ( 45). Интенсивность метки в течение всего периода наблюдения снижалась незначительно, составляя через 120 ч 75 по отношению к исходной величине. Разведение метки в этом опыте отражает деление клеток, которые во время введения сарколизина были в фазе S. Уменьшения числа гранул на 25 могло бы указывать на деление половины этих клеток, но гибель значительного числа меченых клеток делает такой вывод маловероятным. Такое небольшое разведение метки можно объяснить дегенерацией интенсивно меченых клеток. Индекс метки при введении 3Нтимидипа до сарколизина резко уменьшался через 72120 ч (см. 5). Это уменьшение можно объяснить лишь преимущественной дегенерацией клеток, которые во время введения сарколизина были в фазе S. Два других возможных объяснения падения индекса метки (преимущественная пролиферация немеченых клеток и резкое разведение метки в меченых клетках) исключаются, поскольку в течение всего периода наблюдения скорость пролиферации находилась на очень низком уровне. Уменьшение доли меченых клеток с 40 до 6 через 72120 ч показывает, что за это время дегенерирует и исчезает из популяции» 90 клеток, которые во время введения сарколизина были в фазе S.

Через 5 ч после введения сарколизина включение 3Нтимидина в клетки не обнаруживалось и полное торможение синтеза ДНК сохранялось в течение 24 ч (см. 3). Через 48 120 ч интенсивность включения 3Нтимидина и число клеток, синтезирующих ДНК, составляли 40 по отношению к контролю. Следовательно, проявляется торможение синтеза ДНК в течение 5 сут после введения сарколизина.

По оси абсцисс время после введения сарколизииа; по оси ординат интенсивность включения в процентах к контролю.
зы G2 в митоз. Митотический индекс был резко снижен в течение 48 ч и через 72120 ч составлял всего 5 по отношению к контролю. Через 2472 ч наблюдались только патологические метафазы. Следовательно, немногочисленные клетки, входящие в это время в митоз, очевидно, погибают в метафазе.
Для определения влияния сарколизииа на синтез ДНК определяли интенсивность включения 3Нтиммдмп;. Па основании подсчета среднего числа гранул ( 3) было установлено, что через 3 ч после введения сарколизина интенсивность включения 3Нтимидина снижалась в 3 раза. Индекс метки через 3 ч составлял 55 при 44 в контроле, т. е. повышался на 25. Увеличение числа клеток, синтезирующих ДНК «ри торможении включения, можно объяснить накоплением клеток в фазе S вследствие торможения выхода из фазы S и сохранения нормальной скорости перехода клеток в эту фазу. Приводимый ниже расчет показывает, что наблюдаемое увеличение индекса метки приблизительно соответствовало тому, которое следовало ожидать при снижении скорости выхода клеток из фазы S в 3 раза (снижение числа гранул в 3 раза)» и отсутствии влияния на переход из фазы G в фазу S. Поскольку 3 ч составляют ‘/з ts, то за это время и фазу S входит 33 клеток по отношению к числу клеток, находящихся в фазе S. В результате снижения скорости синтеза ДНК в 3 раза за 3 ч синтез ДНК должны закончить 11 клеток, а не 33, как в контроле. В результате этого индекс метки должен увеличиться на 22, что близко к 25, наблюдаемым в опы те. Следовательно, подсчет числа гранул показывал степень торможения синтеза ДНК.