Обход блокировки minotavr.biz через зазор

В культуре клеток HeLa адриамицин

В культуре клеток HeLa адриамицин тормозил синтез ДНК и быстро блокировал вступление клеток в митоз, что показывает чувствительность к антибиотику клеток в фазах S и G2 (Kim, Kim, 1972). В синхронизированной культуре клеток СНО хомячка адриамицин не влиял на переход из митоза в фазу Gi. При добавлении к клеткам в начале фазы G адриамицин задерживал на 13 ч вступление клеток в фазу S, но затем, несмотря на присутствие антибиотика в среде, клетки вступали в фазу S. При воздействии на клетки в ранней фазе S адриамицин резко тормозил синтез ДНК. Этот эффект проявлялся при очень низкой концентрации антибиотика (10 нг/мл). Андриамицин также тормозил переход клеток из фазы G2 в митоз (Barranco е. а., 1973а). Таким образом, дауномицин и адриамицин блокируют клетки в фазах Gi, S и G2, что, очевидно, является характерным свойством антибиотиков из группы антрациклинов.

Таким образом, ингибиторы синтеза

Таким образом, ингибиторы синтеза PITK и белка оказывают значительное влияние на клеточный цикл. Критерием влияния ингибиторов на клетку в фазе Gi является нарушение перехода в фазу S; на клетку в фазе G2 нарушение вступления в митоз. К актиномицину D высокочувствительны клетки в первой половине фазы Gj. Фаза S большинства видов клеток нечувствительна. На фазу G2 актиномицин D влияет лишь в высоких концентрациях и, как правило, только в ее первой половине. Ингибиторы синтеза белка пуромицин и циклогексемид, блокируют клетки в фазах Антибиотики. В настоящем разделе
Антибиотики. В настоящем разделе рассмотрим влияние на клеточный цикл трех новых антибиотиков с выраженным противоопухолевым действием дауномицина, адриамицина и блеомицина. Действие актиномицина D на клеточный цикл было изложено в предыдущем разделе. Дауномицин в первичной культуре мышцы крысы значительно тормозил синтез ДНК в поздней фазе S и не влиял на синтез ДНК в ранней фазе S (Silvestrini е. а., 1970). Максимальное торможение синтеза ДНК наблюдалось при действии дауномицина на клетки в середине фазы Gb когда скорость синтеза РНК была максимальной. Переход клеток из фазы G2 в митоз прекращался сразу после начала действия антибиотика. Таким образом, клетки первичной культуры мышцы были наиболее чувствительны к дауномицину в середине фазы Gb в конце фазы S и на протяжении всей фазы G2.

Tobey с соавторами

Tobey с соавторами (1966) показали, что в синхронизированной культуре клеток СНО хомячка деление клеток прекращается через 104 мин после добавления актиномицина D и через 36 мин после добавления пуромицина. Часть клеток при действии пуромицина вступала в метафазу, в которой блокировалась. Авторы заключают, что синтез информационных РНК, необходимых для митоза, происходит в первой половине фазы G2 за 78 мин до синтеза белков, необходимых для вступления в митоз. О. И. Епифанова с соавторами (1969) показали, что к пуромицину чувствительна вся фаза G2 и что единичные клетки, вступающие в митоз в присутствии ингибитора, задерживались в метафазе. Эти данные показывают, что торможение синтеза белка в фазе G2 тормозит не только вступление клеток в митоз, но и процесс митоза в клетках, которые не были блокированы в фазе G2. Sisken и Wilkes (1967) показали, что включение пфторфенилаланина в белок в фазе G2 вызывает увеличение длительности метафазы. В дочерних клетках длительность метафазы была также увеличена, что указывает на сохранение дефектного белка и его использование в последующих генерациях. Пуромицин вызывал удлинение метафазы в двух последовательных митозах одной клетки. Это показывает, что нарушение синтеза белка влияет на клетку в течение по крайней мере двух циклов.

В синхронизированной культуре

В синхронизированной культуре фибробластов L5178Y синтез ДНК прекращался через 3 ч после добавления циклогексемида к клеткам в фазе S (Fujiwara, 1972). Было показано, что ингибитор не влиял на продолжение синтеза ДНК в индивидуальных репликонах и тормозил инициацию синтеза ДНК в новых репликонах. Таким образом, ингибиторы синтеза белка не только тормозят инициацию синтеза ДНК при действии на вторую половину фазы Gb но и в большинстве изученных типов клеток тормозят синтез ДНК в клетках в фазе S.
Рассмотрим работы, в которых изучалось влияние ингибиторов синтеза РНК и белка на вступление клеток в митоз. В первичной культуре почек хомячка актиномицин D даже в высокой концентрации (330 нг/мл) не влиял на переход клеток из фазы G2 в митоз. При действии на клетки в фазе S актиномицитл D тормозил их вступление в митоз. Поскольку синтез ДНК в этих клетках не был заторможен, эти данные показывают на существование вторичного блокирования клеток в фазе G2. Очевидно, синтез РНК, необходимых для митоза, заканчивался в конце фазы S. Блокирование перехода из фазы Gi в фазу S проявлялось при значительно меньших концентрациях, чем вторичное блокирование клеток в фазе G2 (Kishimoto, Lieberman, 1964). Таким образом, переход из фазы Gi в фазу S был наиболее чувствителен к актиномину D и только этот переход блокировался при действии препарата в концентрации, избирательно тормозящей синтез РНК в ядрышке. Пуромицин блокировал переход клеток из фазы G2 в митоз и был эффективен в течение всего периода G2.

Doida и Okada

Doida и Okada (1972) исследовали влияние высокой концентрации актиномицина D (0,5 мкг/мл) и пуромицина на клеточный цикл в культуре лимфобластов L5178Y. Оба ингибитора не влияли на переход клеток из митоза в фазу Gi. Переход клеток в фазу S был заторможен при действии актиномицина в начале фазы Gb а под влиянием пуромицина в середине и конце фазы Gi. Однако tGi в этих клетках составляет всего Р/2 ч, поэтому определение периодов чувствительности является приближенным. Актиномицин D тормозил переход. из фазы G2 в митоз в значительно меньших концентрациях, чем переход из фазы Gj в фазу S. В случае фибробластов L и клеток асцитного рака Эрлиха наблюдалось обратное соотношение (см. выше). Таким образом, сравнительная чувствительность клеток в фазах Gj и G2 к актиномицину D отличается в клетках разного типа. Пуромицин в одинаковой концентрации тормозил вступление клеток в митоз и в фазу S. В фазе Gi чувствительность к пуромицину проявлялась позже, чем чувствительность к актиномицину D, что соответствует последовательному синтезу РНК и белка, необходимых для инициации синтеза ДНК В ряде работ детально изучалось влияние торможения синтеза белка на переход клеток в фазу S. В культуре клеток HeLa вся фаза Gi была одинаково чувствительна к пуромицину и циклогексемиду. Воздействие ингибиторов в течение 2 ч на разных этапах фазы Gi вызывало одинаковую задержку вступления клеток в фазу S (Terasima, Yasukawa, 1966). Длительность задержки перехода в фазу S находилась в линейной зависимости от времени действия пуромицина. В культуре клеток хомячка пуромицин задерживал переход клеток в фазу S на время, равное продолжительности его воздействия, плюс время «дополнительной задержки» (Schneiderman е. а., 1971). Величина дополнительной задержки находилась в линейной зависимости от возраста клетки в первой половине фазы Gi, достигала максимума в середине фазы Gi и затем не изменялась. Таким образом, к пуромицину по критерию длительности блокирования перехода в фазы S были более чувствительны клетки во второй половине фазы Gi. Ве личина дополнительной задержки также зависела от времени действия пуромицина и достигала максимума 4,25 ч при действии пуромицина в течение 6 ч. Дополнительная задержка перехода в фазу S указывает, по мнению Schneiderman с соавторами (1971), на время, за которое восстанавливается белок инициатор синтеза ДНК, распавшийся за время действия пуромицина. Было рассчитано, что за 2 ч распадается половина этого белка. Действие пуромицина на клетки в фазе S полностью тормозило синтез ДНК. Однако сразу после удаления ингибитора синтез ДНК восстанавливался. Отсутствие дополнительной задержки синтеза ДНК при действии пуромицина в фазе S показывает, что в этих клетках для восстановления синтеза ДНК нет необходимости в повторении явлений, определяющих инициацию синтеза ДНК Явление дополнительной задержки перехода клеток в фазу S при действии пуромицина в фазе G] не является свойством всех клеток, В клетках L (Terasima, Yasukawa, 1966) и HeLa (Kim е. а., 1968в) длительность задержки перехода в фазу S была меньше времени действия ингибиторов синтеза белка.